小鼠單克隆抗體制備5大具體過程
更新時間：2020-10-22 點擊次數(shù)：723次
小鼠單克隆抗體優(yōu)點：高度特異性、高度均一性、可快速、大量、連續(xù)生產(chǎn)、應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，涵蓋檢測治療等多個領(lǐng)域、制備方案和工具成熟、應(yīng)用前景良好。請貯存于2-8℃，切勿冷凍，避免陽光直曬。未使用完的酶標板條應(yīng)密封，2-8℃保存，具有方便、快速、靈敏等特點，因其性質(zhì)穩(wěn)定、使用方便、價格低廉、在科研領(lǐng)域用途比較廣泛，本ELISA試劑盒有效期為12個月，生產(chǎn)日期見批號，實驗顯色深，含量少，顯色淺，含量多，本試劑盒靈敏度0.1ppb。
小鼠單克隆抗體制備5大具體過程：
1、免疫動物
免疫動物是用目的抗原免疫小鼠醫(yī)學教育網(wǎng)|搜集整理，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。
2、細胞融合
采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細胞。
3、選擇性培養(yǎng)
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。
4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化
在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細胞，只有少數(shù)是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，及時進行凍存。
5、單克隆抗體的大量制備
小鼠單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。
?。?）體內(nèi)誘生法
取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預處理。1-2周后，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。
?。?）體外培養(yǎng)法
將雜交瘤細胞置于培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，雜交瘤細胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養(yǎng)上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn)，大大提高了抗體的生產(chǎn)量。
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